西安事變后，蔣介石被迫結(jié)束十年內(nèi)戰(zhàn)，與共產(chǎn)黨實行第二次合作。1937年七七事變后，終于建立了國共合作抗日民族統(tǒng)一戰(zhàn)線，蔣介石積極部署和指揮中國軍隊開赴華北和淞滬前線，抗御日本侵略軍,他先后指揮了淞滬會戰(zhàn)，太原會戰(zhàn)，徐州會戰(zhàn)，武漢會戰(zhàn)等重大戰(zhàn)役。廣大愛國將士奮勇殺敵，至1938年10月，使日軍傷亡45萬余人，粉碎了日本帝國主義妄圖速戰(zhàn)速決、迅速滅亡中國的戰(zhàn)略計劃。蔣介石在政治民主化方面作出一些許諾，釋放政治犯，修改反動條例，召開國民參政會等，全國一時出現(xiàn)一片新氣象。但由于蔣介石實行片面抗戰(zhàn)路線和單純軍事防御的戰(zhàn)略戰(zhàn)術(shù)，又幻想并等待國際“調(diào)停”制止日本侵略，因而不能抵御占有很大優(yōu)勢的日本侵略軍，華北、東南和華中大片國土相繼淪陷。
　　武漢保衛(wèi)戰(zhàn)結(jié)束后，抗日戰(zhàn)爭由戰(zhàn)略防御階段轉(zhuǎn)入戰(zhàn)略相持階段。蔣介石表示了繼續(xù)抗戰(zhàn)的決心，汪精衛(wèi)等人則對抗戰(zhàn)前途完全失望，叛國投敵。1939年1月，蔣介石任國防最高委員會委員長。他對中國共產(chǎn)黨和人民武裝力量在抗戰(zhàn)中迅速發(fā)展壯大憂心忡忡，乃實行溶共、防共、限共、反共的方針，不斷制造反共摩擦。
　　1941年12月太平洋戰(zhàn)爭爆發(fā)后，蔣介石積極開展外交活動，與美、英同盟，任中國戰(zhàn)區(qū)最高統(tǒng)帥，得到了美國的物資和財政援助。他派中國遠征軍去緬甸，與英美聯(lián)軍聯(lián)合作戰(zhàn)，打通了中印公路。美、英為了聯(lián)合中國共同抗擊日本，許諾廢除不平等條約所規(guī)定的在華特權(quán)，簽訂了中美、中英“新約”。1943年11月，蔣介石出席開羅會議，與美國總統(tǒng)羅斯福、英國首相丘吉爾會談對日聯(lián)合作戰(zhàn)方略及戰(zhàn)后和平條件。1945年6月派宋子文等去蘇聯(lián)會談，8月兩國外長簽署了《中蘇友好同盟條約》及有關(guān)協(xié)定。