銀屑病中細(xì)胞凋亡相關(guān)基因bcl-2、Fas、bax的檢測(cè)

銀屑病中細(xì)胞凋亡相關(guān)基因bcl-2、Fas、bax的檢測(cè)摘要 為了探討細(xì)胞凋亡相關(guān)基因bcl-2、Fas、bax在銀屑病發(fā)病中的意義，采用免疫組化ABC法、SABC法檢測(cè)了這幾種基因在15例銀屑病組織中的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)銀屑病的角質(zhì)形成細(xì)胞中抑凋亡基因bcl-2幾乎不表達(dá)，促凋亡基因Fas、bax陽(yáng)性表達(dá)。提示促凋亡基因Fas、bax在銀屑病中發(fā)病起重要作用，而抑凋亡基因bcl-2作用可能不大。 
關(guān)鍵詞銀屑病、 bcl-2基因、 Fas基因、 bax基因。
銀屑病的發(fā)病機(jī)理尚不明確，角質(zhì)形成細(xì)胞異常增生和角化不全是銀屑病的主要病理改變，以往對(duì)這方面的研究主要集中在免疫學(xué)和生化學(xué)方面。近年來(lái)銀屑病與細(xì)胞凋亡的關(guān)系逐漸受到越來(lái)越多學(xué)者的重視。國(guó)外有學(xué)者報(bào)道銀屑病表皮中角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡異常增多。抑凋亡基因bcl-2和促凋亡基因Fas、bax是現(xiàn)今研究較多、較重要的幾個(gè)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因。為了探討這幾種基因在銀屑病發(fā)病中的意義，我們采用免疫組化方法檢測(cè)了銀屑病中細(xì)胞凋亡相關(guān)基因bcl-2、Fas及bax。
1 材料和方法
1．1標(biāo)本來(lái)源：采用1994-1997年我院保存的石蠟包埋組織塊。尋常型銀屑病15例，其中男8例，女例；年齡11-68歲，平均年齡 29.13歲；均為進(jìn)行期銀屑病。6名正常人皮膚組織，皆取自皮膚外科行重瞼術(shù)、面部美容切除術(shù)者的皮膚，石蠟包埋作為對(duì)照組。測(cè)定前先將石蠟包埋組織塊作常規(guī)組織切片及HE染色，在光鏡下核對(duì)診斷，證實(shí)其病理診斷無(wú)誤方采用。
1．2試劑：鼠抗人bcl-2單克隆抗體購(gòu)自Dako公司，生物素化羊抗鼠單克隆抗體系華美生物制品公司產(chǎn)品。兔抗人Fas多抗、兔抗人bax多抗及鏈酶親和素-生物素-過(guò)氧化酶復(fù)合物免疫組化試劑盒（簡(jiǎn)稱SABC試劑盒）均購(gòu)自武漢博士德生物工程公司。 
1．3方法：載玻片用APES處理后干燥備用，切取4-5μm厚的石蠟切片，常規(guī)脫蠟水化。Bcl-2基因的檢測(cè)參照ABC法稍加改進(jìn)，陽(yáng)性對(duì)照為正常淋巴結(jié)，陰性對(duì)照為不加一抗。Fas、bax基因的檢測(cè)采用SABC法，陽(yáng)性對(duì)照分別為武漢博士德生物工程公司提供的Fas、bax基因陽(yáng)性對(duì)照片，陰性對(duì)照為不加一抗。 
1．4判斷：顯微鏡下觀察，棕黃色為陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：強(qiáng)陽(yáng)性（+ + +）指50%以上細(xì)胞陽(yáng)性染色；中等強(qiáng)度陽(yáng)性（+ +）指25%-50%細(xì)胞陽(yáng)性染色；弱陽(yáng)性（+）指25%以下細(xì)胞陽(yáng)性染色；陰性（-）指細(xì)胞均無(wú)任何陽(yáng)性染色。
2 結(jié)果 6例正常人皮膚組織中：bcl-2基因除部分基底細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)外，余陰性。、Fas和bax基因?yàn)殛幮员磉_(dá)。15例銀屑病組織中：bcl-2基因在15例表皮增生的角質(zhì)形成細(xì)胞中均呈陰性表達(dá)，但14例部分基底細(xì)胞和浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞呈陽(yáng)性染色；Fas基因在12例銀屑病組織中呈陽(yáng)性表達(dá)；bax基因在13例中呈陽(yáng)性，陽(yáng)性染色遍布表皮各層角質(zhì)形成細(xì)胞中及真皮淺層浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞上。在缺少一抗的對(duì)照反應(yīng)中結(jié)果均為陰性，而作為陽(yáng)性對(duì)照的正常淋巴結(jié)及Fas、bax基因陽(yáng)性對(duì)照片則呈廣泛強(qiáng)陽(yáng)性染色。
3 討論 bcl-2基因最早是1984年Tsujimoto等從濾泡性淋巴瘤中分離出來(lái)的一種癌基因，位于18q21位點(diǎn)的bcl-2基因移至免疫球蛋白重鏈基因14q32位點(diǎn)附近，造成bcl-2蛋白的異常表達(dá)。bcl-2基因可抑制許多因素引起的細(xì)胞凋亡，故稱為：“細(xì)胞凋亡抑制基因”。Fas抗原又稱Apo-1或CD95，F(xiàn)as分子是個(gè)典型的Ⅰ型膜蛋 白，屬腫瘤環(huán)死因子（TNF）/神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）受體家族中的一員。研究發(fā)現(xiàn)Fas單克隆抗體在體內(nèi)體處與Fas結(jié)合后均能導(dǎo)致表達(dá)Fas的細(xì)胞發(fā)生凋亡，從而證明Fas是一種識(shí)別Fas配體，并將凋亡信息傳遞給細(xì)胞的細(xì)胞表面受體，故Fas基因又稱“凋亡基因”。Bax基因?qū)儆赽cl-2基因家族成員，其功能與bcl-2基因相反，為促凋亡基因，bax蛋白可與bcl-2蛋白形成異源二聚體，從而抑制bcl-2基因的抗凋亡作用。我們的實(shí)驗(yàn)中正常的皮膚組織部分基底細(xì)胞bcl-2基因呈陽(yáng)性反應(yīng)，這與國(guó)外學(xué)者的報(bào)道相符合，有文獻(xiàn)報(bào)道這些陽(yáng)性細(xì)胞為黑素細(xì)胞，正常表皮中黑素細(xì)胞與基底角質(zhì)形成細(xì)胞的比例為1：30，提示黑素細(xì)胞死亡和再生的控制是非常嚴(yán)格的。黑素細(xì)胞bcl-2基因強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，這可能與保護(hù)它們避免受內(nèi)外環(huán)境的影響如紫外線的照射，減少凋亡有很大關(guān)系。在銀屑病中除黑素細(xì)胞和浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞為陽(yáng)性外，表皮增生的角質(zhì)形成細(xì)胞均為陰性，這提示bcl-2基因可能在銀屑病中所起的作用不大。目前認(rèn)為在這類丘疹鱗屑性疾病中主要是bcl-X基因起作用。Wrone-Smith等及Foreman等發(fā)現(xiàn)銀bcl-X1基因在增生的角質(zhì)形成細(xì)胞上呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，認(rèn)為bcl-X1基因可能通過(guò)抑制表皮細(xì)胞上呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，認(rèn)為bcl-X1基因可能通過(guò)抑制表皮細(xì)胞凋亡，從而延長(zhǎng)細(xì)胞的存活期。而本實(shí)驗(yàn)中銀屑病組織促凋亡基因Fas、bax均為廣泛性表達(dá)，這與國(guó)外學(xué)者的結(jié)論一致。因此，我們認(rèn)為在銀屑病中促凋亡基因Fas、bax起重要作用，而抑凋亡基因bcl-2作用可能不大。

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